结肠慢性传输型便秘的发病原因

　　结肠慢性传输型便秘的发病机制，我们采用免疫组织化学及计算机图像分析方法，对33例STC患者结肠肌间神经丛内神经丝蛋白(Neurofilament，NF)和S-100蛋白进行了定量研究，并与病程和发病年龄进行了相关性分析，现将结果报道如下。　　

　　对象和方法

　　1.临床资料：选择1990年1月至1999年1月间经手术治疗的STC女性病人33例作为研究对象(STC组)，年龄25～56岁，平均40.5岁；病程2～26年，平均9年。手术方式均为次全结肠切除升直吻合术。以上病人均按下列标准确定诊断：(1)便意淡漠(多在5 d以上无便意)伴腹胀，靠口服泻剂通便，用药量渐增多而通便效果渐差，病史多在2年以上。(2)结肠传输时间明显延长，72 h排出Marker明显少于80%。(3)钡灌肠透视及排粪造影排除结直肠器质性病变和出口处功能性梗阻。选择同期手术治疗的无便秘病史及服用泻剂史的非梗阻性结肠癌女性病人25例作为对照组，年龄28～60岁，平均42岁。2.主要仪器设备和试剂：研究应用的主要仪器有：Leica光学显微镜、Olympus照相显微镜及CMIAS真彩色图像分析系统(日本产)等。

　　方法：(1)分别于STC组和对照组的升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠的结肠袋区取1.0 cm×1.0 cm的全层肠壁作为研究材料，标本取下后即用生理盐水冲洗干净，放入10%甲醛溶液中固定24 h，然后梯度酒精脱水，石蜡包埋，连续横断面切片法切成厚4 μm组织片，每张载玻片贴8个组织片，40℃ 10 h烘干备用。(2)常规HE染色。(3)免疫组织化学染色：将石蜡切片常规脱蜡后用3%过氧化氢室温孵育10 min，用蒸馏水冲洗、PBS液浸泡，然后修复NF抗原和S-100蛋白抗原。再先后分别加入NF一抗、NF二抗和S-100蛋白一抗、S-100蛋白二抗。分别用辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素和碱性磷酸标记链霉卵白素工作液作NF及S-100蛋白染色，最后用苏木素(DAB显色)或固红(NBT显色)复染，中性树胶封片。(4)计算机图像分析：每张切片高倍镜下(×200)沿肌间神经丛的方向取5个视野作体视学分析，计算每张切片的平均光密度和积分光密度的平均值。(5)统计学处理：将平均光密度值和积分光密度值对数转换后，用PEMS软件包分别对两组结肠各段进行组内和组间NF和S-100蛋白的平均光密度和积分光密度平均值的两两比较(t检验)，并将STC组乙状结肠肌间神经丛内NF的平均光密度值和S-100蛋白含量与便秘病程、发病年龄进行相关性分析。　　

　　结果

　　1.HE染色：STC组33例病人中，肌间神经丛神经节细胞与对照组相比差异无显著意义，无炎性细胞浸润。4例结肠壁肌层变薄。

　　2.免疫组织化学染色：STC组33例病人中，结肠各段肌间神经丛内NF表达阳性颗粒呈棕黄色，光镜下见神经节细胞及轴突内NF阳性颗粒堆积聚集，染色较深。结肠各段内NF平均光密度值明显高于对照组(图1、图2)(P<0.01)；28例(病史均≥3年)积分光密度值与对照组比较差异无显著意义P>0.05(表1)，5例(病史<3年)结肠各段NF表达虽呈阳性聚集，但积分光密度值减少。对照组25例结肠各段NF阳性颗粒均匀分布于肌间神经丛内，各段之间的含量差异无显著意义(P>0.05)(表1)。S-100蛋白表达阳性颗粒为蓝色，STC组各段结肠中S-100蛋白的平均光密度和积分光密度值均高于对照组(P<0.01)，但STC组和对照组内各段之间差异无显著意义(P>0.05)(表2)。